加药的两种方法:
1.把每一个孔的液体吸出来,再把用培养基配好的药加进去。吸液体的时候,把板子倾斜竖起来70°(方便你看),用200μl的枪调最大量程,套一个200μl枪头再套一个10μl枪头,从孔的最低点把液体吸出来。注意不要一下子把整个板的液体全吸出来,因为你加药前还要每一个浓度都混匀,很费时,最好不要让你的细胞空置太久,一般都是半个板地来。
2.不吸液,直接加药,不过记住要配2x浓度的药,因为还有之前的培养基,加进去就会稀释成一半了。后续也要加20μl的cck-8(cck-8的量是孔内液体的10%)。注意200μl的体液太满了,很容易洒出来。
加cck-8 两种选择,一是用10μl的枪头加,先把5ml的cck-8用1.5mlEP管分装(方便操作),用10μl的枪头吸cck-8,注意要把枪头外壁沾的液体揩干净,枪头伸进液面(刚好伸入,不要进太深),打进去不出气泡,这样很费神,而且手慢的,第一个孔和最后一个孔的OD值就有了这十几分钟的误差了;二是用200μl的枪头加,先准备好无血清培养基和cck-8,混匀,然后把96孔板的里的液体一次性全吸出来,枪调110μl,加入含cck-8无血清培养基。这样可以很好地避免微量量程带来的误差。